HFL1人胚肺成纤维细胞HFL1细胞系

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HFL1人胚肺成纤维细胞HFL1细胞系

HFL1人胚肺成纤维细胞HFL1细胞系

培养环境：air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%

二、收货处理方式（T25瓶/冻存管）

【T25】

①快递保存温度：室温

②初步平衡：T25瓶表面消毒后，放37度培养箱平衡复温2h以上

③处理方式：吸走大部分培养基，留10-12ml培养基，拍照并观察细胞。密度80%以上即可吸走培养基消化传代，若密度低于80%可以留10-12 ml继续培养至细胞密度80%以上

④接种方式：T25传代第①次建议1:2传代，即瓶T25传成两瓶

⑤注意事项：若细胞出现漂浮，T25瓶不开封，放至37度培养箱过夜，若细胞贴壁即说明活性正常，按正常操作消化传代即可；若未贴壁，收集细胞培养基离心后，将细胞重悬接种到新的培养瓶中，同时原瓶还贴壁的细胞加培养基继续培养
发货T25瓶装满大约有75ml培养基，可以收集起来，1500rpm离心5min后，取上清4度保存，用于培养细胞，以平稳过渡到客户自己的培养基

【冻存管】

①快递保存温度：液氮长期保存或-80度3天以内

②初步平衡：无须平衡，直接放入-80冰箱或者液氮罐保存

③处理方式：37度水浴摇晃尽快融化细胞，直接在冻存管内将细胞离心。离心转速以离心力150g(约900rpm)左右，1min为宜，弃上清，沉淀用新鲜培养基重悬后接种到10cm培养皿，显微镜下观察细胞并拍照，24h后换液一次

④接种方式：一管细胞建议接种到10cm培养皿或者T25瓶

⑤注意事项：收货时若发现干冰化完，检查冻存管是否融化，若已融化需直接离心细胞接种观察，若未融化可以将细胞按正常步骤保存，以上情况及时反馈
干冰发货的细胞只能在-80保存3天左右，长时间保存会出现活性下降。干冰发货均为两支，客户先复苏一支，若复苏失败及时联系我方并在我方指导下复苏第二支。若客户同时复苏两支均状态不佳，我方将不提供免费售后服务

特殊情况：

1.若培养瓶或者冻存管出现破碎或漏液情况，及时拍照联系销售反馈，按指导进行进一步处理。若只是外包装破损一般不影响培养瓶和冻存管，请放心使用。

2.若无法观察到细胞，建议收集细胞培养基，1200rpm离心5min，观察细胞沉淀量，并用少量培养基重悬沉淀后，取部分悬液放到计数板或者载玻片上观察细胞。

3.部分细胞增殖较快，发货细胞量较多时，培养基可能出现颜色变黄现象。继续培养使用此类培养基时，需要及时观察培养基颜色变化，缩短培养基换液周期，并每瓶多加2-3ml培养基。

4.收货当天不处理细胞时，T25瓶可以消毒拆封口膜后不拧开瓶盖放37度培养箱静置过夜，但不建议超过24h；冻存管可以直接放液氮长期保存或-80度3天以内，必须一周内复苏一只培养检查，否则将超过一周售后期。

培养操作说明：

1.细胞培养需要充足经验，新手或者没有类似细胞培养经验的人建议在专业人士指导下进行操作，尤其注意无菌操作、贴壁细胞消化时间及细胞培养密度。

2. 部分细胞在传代后时，会有以下现象：细胞内会有黑色小点、细胞间隙有些颗粒物、培养基漂浮一些死细胞。以上都是细胞培养常见现象，不影响细胞增殖和实验。

3. 细胞内的黑色颗粒是细胞外分泌泡、细胞器折光或者细胞膜表面物质，这个属于细胞自身特性，无法清除也无法改变，具体情况可以参考ATCC、DSMZ等大型细胞库细胞照片。细胞外的黑色颗粒大部分是细胞碎片，可以吸走培养基后用PBS润洗；润洗不能清除的可以消化细胞重新接种，消化完成后加*培养基终止消化，混匀细胞，收集细胞悬液900-1000rpm(约150g)离心3min，弃上清。再加5ml PBS重悬细胞，再离心后，用*培养基重悬接种到新的培养皿。第二次PBS重悬是为了去除碎片，如果平时碎片比较少，传代时可以省略PBS重悬的步骤；如果碎片很多，建议PBS多洗几次。

4. 不同品牌胰m溶液成分不一样，消化活性差别比较大，更换胰m品牌时需重新摸索消化时间，以消化到细胞间隙变大但未漂浮为准，此时结束消化最佳，避免消化过度导致细胞死亡。细胞消化后比较脆弱，吹打力度不要过大，不要产生过多气泡，否则会严重影响细胞状态。

5. 不同细胞生长速度差异较大，所有细胞收货后第①次传代建议按1:2传代。正常培养时生长较慢、密度较低的细胞需要传代时按1:2传代，生长较快、密度较高的细胞可以按1:4传代。

6. 细胞生长偏慢时，可以将血清浓度增加到15-20%培养一段时间，待细胞状态和生长速度恢复正常后换回10%血清。