bEnd.3 （小鼠脑微血管内皮细胞）

一、细胞基本属性
细胞名称:bEnd.3 （小鼠脑微血管内皮细胞）
细胞别称:bEnd.3; bEND.3; b.End3; Bend.3; bEnd3; brain-derived Endothelial cells.3
细胞货号:SNL-158
细胞种属:小鼠
生长情况:贴壁
培养条件:H-DMEM+10%FBS+1%双抗
培养环境:air, 95%; carbon dioxide (CO2), 5%
二、细胞培养操作
换液周期:2-3天
培养基体积:T25瓶10-12ml；10cm皿12-15ml
传代比例:1:2-1:4（具体情况视细胞生长速度及密度决定）
传代方法:
1.尽量吸干净T25瓶原培养基；
2.加3-4ml 常温PBS轻轻润洗细胞10-20s，吸走润洗的PBS；
3.T25瓶加1ml左右胰m，轻轻晃动培养瓶以使胰m铺匀瓶底细胞层；
4.将培养瓶放入37度培养箱消化；
5.消化到细胞间隙变大，但未*脱落时加2-3ml*培养基终止胰m消化；
6.混匀细胞，900rpm离心3-5min，弃上清；
7.加新的*培养基轻轻重悬细胞，均匀分到新的培养瓶里；
8.补足*培养基，将培养瓶放回培养箱静置培养；
注意事项:不同品牌胰m消化时间差别较大，注意严格控制消化时间
消化传代细胞时吹打细胞注意尽量轻柔，不要产生过多气泡以免影响细胞状态。
三、细胞冻存操作
冻存液配方:92%FBS+8%DMSO(新手推荐)或92%*培养基+8%DMSO(高手推荐);
冻存规格:200-300万/ml，1ml每管
冻存方法:
1.消化并离心获得细胞沉淀后，加配置好的冻存液轻轻重悬细胞；
2.将细胞悬液尽快移入已经做好标记的冻存管；
3.将冻存管转入程序冻存盒，放入-80度冰箱过夜，第二天转入液氮保存；没有程序冻存盒的实验室，加入细胞后可以将冻存管放在泡沫盒中4度静置5-10min，再-20度静置2h后转入-80度过夜，第二天转入液氮保存
注意事项:冻存细胞转入液氮后及时复苏一管检查细胞冻存活性，若有异常，及时调整实验方案
Tips：
1.细胞培养时黑点可能会比较多，具体原因参见培养操作说明2、3条；

我们推荐使用尚恩生物bEnd.3 （小鼠脑微血管内皮细胞）*培养基（产品货号：SNLM-158）作为体外培养的培养基。