a549细胞是一种广泛使用的人肺腺癌细胞系

　　a549细胞是一种广泛使用的人肺腺癌细胞系，来源于原发性肺肿瘤。具有高度增殖性，现已被用于各种研究应用。在自然界中，这些细胞是鳞状的，它们可以通过肺泡扩散传播一些物质，如水和电解质。如果将A549细胞体外培养，它们会成长为单层细胞，附着或紧贴在培养瓶上。人肺泡上皮细胞株A549可以固定或悬挂在体外的溶液。这些细胞的另一个特点是他们能够合成卵磷脂，并且含有高度不饱和的脂肪酸，这对于维持细胞膜磷脂有重要意义。
 

　　a549细胞传代：
 

　　(1)无菌操作打开培养瓶瓶盖，倒掉培养液。
 

　　(2)向已经长满得细胞中加入消化液1m1，轻轻摇动培养瓶，使消化液流遍所有得细胞表面，吸弃或倒掉，轻轻冲洗细胞表面2~3遍，以尽可能去除原培养液中得牛血清。
 

　　(3)加入1ml消化液，在37℃培养箱中孵育5~8min后把培养瓶放置在倒置显微镜下观察，发现细胞得胞质回缩、胞间质增大后，立即终止消化、
 

　　(4)加入5ml预热至37℃得培养液，用玻璃吸管反复吹打以分散细胞、吹打过程按顺序进行，从培养瓶底部一边开始到另一边结束，以确保所有得底部都被吹到、
 

　　(5)吸取一半得细胞悬液，接种到新得25cm2培养瓶中，补足培养液，并且添加10%~20%得胎牛血清。通常每瓶液体量为5～10ml。
 

　　(6)倒置显微镜下观察，37℃、5%C0。培养。
 

　　a549细胞的维持和培养：
 

　　(1)准备一个盛有37℃温水的烧杯，从液氮罐中取出存有A549细胞的冻存管，放于37℃温水中，用镊子夹住轻轻摇动使其迅速融化。
 

　　(2)1000~2000r，3~5min离心。
 

　　(3)在无菌操作台中采用75%的乙醇*擦拭冻存管，然后打开冻存管，注意动作要轻柔。
 

　　(4)用1ml枪头将上清液去除，加入1ml预热的细胞培养液将细胞吹散开，转移至25cm2培养瓶中。
 

　　(5)补充4ml的RPMI1640培养基，并且添加10%的胎牛血清。
 

　　(6)倒置显微镜下观察，37℃、5%C02培养。
 

　　(7)24h后，更换新的培养液。
 

　　(8)常规传代培养。