小鼠原代细胞的相关知识普及

　　小鼠原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织和器官，经体外培养后，直到传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），经消化，分解成单个游离细胞，在人工培养下，使其不断的生长及繁殖。

 

　　细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。是用无菌的方法将动物体内的组织（或器官）取出，模拟动物体内的生理条件，在体内进行培养，使其不断生长、繁殖，人们借以观察细胞生长、繁殖、细胞分化以及细胞衰老等过程的生命现象。要使细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二是严格控制无菌条件。

 

　　细胞培养的意义：具有其他生物技术不可对比的优点培养条件易改变和控制便于单因子分析便于人们直接对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察在生物学的各个领域如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学及病毒学等已被广泛应用。细胞培养的局限性在脱离机体复杂环境下细胞培养条件与躯体环境有一定距离观察到的结果有时难以正确反映机体内的状况细胞培养得到的产物少。

 

　　小鼠原代细胞实验步骤:

　　1、小鼠麻醉

　　根据体重计算相应的麻醉剂量并腹腔注射（也可以用异氟烷进行空气麻醉）

　　2、对*麻醉后的小鼠进行解剖，打开腹腔，找到小鼠下腔静脉及门静脉，使用滞留针插入下腔静脉，将50-60ml的缓冲溶液一在10-20min内缓慢注射进入小鼠血液循环内，看到小鼠肝脏有明显肿胀时剪开门静脉，完成后改用缓冲溶液二进行冲洗。

　　3、冲洗完成后，将小鼠肝脏剪下，转移至DMEM高糖培养基，用DMEM培养基清洗2-3次后，使用灭菌镊子将肝脏在培养基内撕开，使原代肝细胞从肝脏内流出。

　　4、将分离得到的肝脏细胞过筛网筛选，过滤组织碎块及其他杂质，并对细胞混悬液离心，按照一定的离心力得到初步的肝细胞沉淀，此时的肝细胞中混杂着肝脏实质细胞和非实质细胞，需要使用percoll离心液进行梯度离心。

　　5、梯度离心后的细胞即为原代肝脏实质细胞，重悬后计数即可用于后续的实验，若对细胞纯度存疑，也可以进行流式测定。