原代细胞复苏操作

　　一、准备材料
 

　　(1)仪器：净化工作台、离心机、恒温水浴箱、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱
 

　　(2)玻璃器皿：吸管(弯头、直头)、培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸
 

　　(3)塑料器皿：吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1～2ml)
 

　　(4)其他物品：微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪
 

　　(5)试剂：PBS、小牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%)
 

　　二、操作步骤

 

　　(1)原代细胞从液氮容器中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。
 

　　(2)从37℃水浴中取出冻存管，75%酒精**后，打开盖子，用吸管吸出细胞悬液，加到离心管中。PriCells推荐接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。
 

　　(3)离心，1000rpm，5min。PriCells推荐不离心。
 

　　(4)弃去上清液，加入含10%小牛血清培养液重悬细胞，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。PriCells推荐小牛血清浓度依据原代细胞种类。
 

　　(5)次日更换一次1/2培养液，继续培养。
 

　　三、注意事项
 

　　(1)将冻存管从液氮容器中取出时，要做好防护工作，以免**。
 

　　(2)取出冻存管后立即放入水浴中，使其尽快融化(在1-2分钟内)。
 

　　(3)复苏*好用新配制的培养液。