一文带您详细了解大鼠原代细胞

　　大鼠原代细胞培养应选用体重200g的SD大鼠，用胰酶代替胶原酶进行肝脏灌注，分离得到的肝细胞存活率大于90%，且纯度很高。其中，胰酶的浓度很重要，浓度过低肝细胞消化不*，导致杂细胞和结缔组织很多；过高则对肝细胞产生毒性作用，影响存活率。经反复试验得出胰酶的浓度为0.18%，且灌流时维持温度37℃。另外，接种密度也是影响肝细胞存活率的一个重要因素，该试验采用细胞密度为6×105个/mL。
 

　　细胞生长状态好，既能保证细胞活率，又能满足下一步试验要求。肝细胞接种4h后，需用滴管轻吹换液，去除杂细胞及未贴壁的细胞，从而保证肝细胞的纯度及高存活率。在WME培养液中添加胰岛素、地塞米松及胎牛血清，配成*培养液，有利于细胞的增殖分化，使细胞贴壁后拉伸变薄，形态完整，呈岛状连接；试验发现使用自制的鼠尾胶原处理细胞板，肝细胞的贴壁效果更好。
 

　　大鼠原代细胞从机体的组织(如人组织、小鼠组织、大鼠组织和兔组织等)经蛋白酶或其它的方法获得单个细胞并在体外进行模拟机体培养的细胞，称为原代细胞。这类细胞生命周期有限，在有限的生命周期内需掌握好细胞的生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。原代细胞生长缓慢，一般认为，原代细胞培养的1代和到第十代以内统称为原代培养。原代培养的细胞一般传至10代左右就不容易传下去了，细胞的生长会出现停滞，大部分细胞衰老死亡。
 

　　大鼠原代细胞的分离和培养的成本可能相对更高，但原代细胞作为更接近体内环境的研究模型，可让你的研究结论更加接近“事实”，且原代细胞的使用可减少动物实验所需的成本开支。另外在某些人体体内无法进行的实验，原代细胞因其高度保持了在体内的生物学特性，可在一定程度解决这个问题。