您的位置: 首页 > 技术文章 > 人非小细胞肺癌细胞通过去泛素化和稳定KLF4抑制非小细胞肺癌

人非小细胞肺癌细胞通过去泛素化和稳定KLF4抑制非小细胞肺癌

更新时间:2022-08-12浏览:1229次

今天我们来看看一篇关于非小细胞肺癌的文献,首先还是了解下背景。









肺癌是世界上普遍认为的死亡率最高的癌症,没有之一。肺癌中约有85%是非小细胞肺癌(NSCLC)。据报道,早期肺癌患者5年存活率为70%,晚期患者5年存活率不高于20%。在如此高死亡率的情况下,找到新的靶标分子对探索NSCLC治疗有非凡意义。


之前的研究发现,泛素化涉及包括癌症在内的多种疾病,被认为是潜在的治疗靶点。OTUD1作为泛素酶的一员,是由481个氨基酸组成的,与影响诸多分子的各种生理功能有关。在乳腺癌、胰管腺癌、甲状腺癌等均有相关研究证实其作用,还有研究发现OTUD1与改善NSCLC患者的预后有关,然而目前尚不清楚是如何影响NSCLC的发展的。本文通过研究发现OTUD1在NSCLC中下调并抑制癌细胞,还发现OTUD1可以去泛素化并稳定KLF4,这种基因在不同癌症中可以是致癌基因也可以是肿瘤抑制因子。在本文研究中,OUTD1通过稳定KLF4蛋白抑制NSCLC的发展,为NSCLC患者治疗提供了一个很有希望的治疗靶点。


先看看作者用到哪些组织和细胞。


  • NSCLC组织和癌旁组织:获得患者同意并通过伦理审查后,取患者组织于液氮保存备用,一共6组;

  • HBE细胞:BEAS-2B细胞(人正常肺支气管上皮细胞),SNL-203;

  • A549细胞:A549细胞(人非小细胞肺癌细胞),SNL-089;

  • PC9细胞:PC-9细胞(人肺腺癌细胞),SNL-152;

  • NCI-H1299细胞:NCI-H1299细胞(人非小细胞肺癌细胞),SNL-223;

  • Calu-3细胞:Calu-3细胞(人肺腺癌(胸水细胞)),SNL-214;



使用到的组织和细胞还是比较多,看的出来作者还是比较希望实验结果更加准确的。

接下来就看看作者的实验结果吧:

以下仅展示部分细胞实验结果(实验结果经重新调整,非原文描述):

作者经WB检测OTUD1蛋白表达量发现,患者癌组织中OTUD1比正常组织低(图片b,T为癌组织,N为癌旁正常组织),细胞系检测也发现其在癌细胞中表达明显低于正常细胞(图片c)。


图片


随后,又通过转染方式过表达OTUD1方式研究A549与PC9细胞的功能,发现经过表达(图片d)后,细胞增殖活力下降(图片e),迁移率下降、侵袭能力降低(f)。


图片


再通过shRNA沉默OTUD1基因(图片g),发现沉默后的细胞增殖活力上升(图片h),细胞迁移和侵袭能力升高(图片i)。


图片


通过GEPIA数据库筛选,作者发现OTUD1与KLF4存在明显正相关,随后使用PC-9过表达和敲除OTUD1的细胞研究发现,敲除OTUD1发现KLF4半衰期显著降低,但敲除和过表达的细胞中KLP4 mRNA表达量却没有明显差异,说明OTUD1是通过降低KLF4的降解来稳定KLF4蛋白的。进一步的研究发现OTUD1是通过去泛素化KLF4来稳定KLF4蛋白的,限于篇幅,就不再展示了,有兴趣的童鞋可以查看原文。


原文:https://onlinelibrary.wiley.com/doi/abs/10.1111/1759-7714.14320。

图片




本文用到的细胞系,都是常用的肺相关细胞,除CALU-3稍微难培养以外,其他细胞都是比较好培养的:

  1. BEAS-2B细胞(人正常肺支气管上皮细胞,SNL-203是从一位非癌个体的正常人支气管上皮病理切片分离出上皮细胞,用腺病毒12-SV40病毒杂交病毒感染并克隆获得的,细胞角蛋白及SV40抗原染色阳性,是肺癌细胞相关实验中常用的对照细胞;


  2. A549细胞(人非小细胞肺癌细胞,SNL-089,该细胞系是1972年由GiardDJ通过肺癌组织移植培养建系的,源自一位58岁的白人男性。A549能通过胞苷二磷脂酰胆碱途径合成富含不饱和脂肪酸的卵磷脂,角蛋白阳性,这个细胞大概是比较常用的肺癌细胞了;


  3. PC-9细胞(人肺腺癌细胞,SNL-152,该细胞是取自日本患者分化型肺腺癌的细胞,生长时贴壁但仍会有部分圆形细胞,也是常用的肺腺癌细胞;


  4. NCI-H1299细胞(人非小细胞肺癌细胞,SNL-223,这株细胞来源于一个淋巴结转移。患者接受了初期放疗。细胞均一性的部分缺失p53蛋白,并缺少p53蛋白表达。细胞可以合成0.1pmol/毫克蛋白的NMB蛋白,而不合成促胃液释放肽(GRP) ;


  5. Calu-3细胞(人肺腺癌(胸水细胞),SNL-214,该细胞是从一名25岁的白人男性肺腺癌患者的胸水中分离建立的;该患者曾使用过环磷酰胺、博来霉素、阿霉素进行治疗。该细胞接种至裸鼠可成瘤;可作转染宿主。



END

图片




 

联系我们
  • QQ:1242926414
  • 邮箱:1242926414@qq.com
  • 传真:86-027-87800889
  • 地址:武汉东湖新技术开发区高新二路388号武汉光谷国际生物医药企业加速器1.2期C22栋二层

扫一扫,关注公众号

©2024 武汉尚恩生物技术有限公司 版权所有    备案号:鄂ICP备2020018368号-2    技术支持:化工仪器网    Sitemap.xml    总访问量:134465    管理登陆

Baidu
map