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细胞容易污染?如何正确冻存细胞

更新时间:2022-06-15浏览:959次

随着实验室细胞培养的发展,除了原代培养之外,还将建立开发或获得众多的细胞系。每一个细胞系均扩大了其起源细胞的应用,成为有价值的资源。若该细胞系颇为*,则其可能是不可替换的;替换至少也是昂贵与耗时的。因此,必须通过保存细胞系来保证这种重要投资。


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由于培养早期传代培养的选择,有限细胞系的衰老以及连续细胞系的遗传和表现不稳定性,使细胞系在连续培养时有变异倾向。

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此外,即使在管理好的实验室中也有可能发生仪器故障和污染。交叉污染以及错误辨识的发生率也很高。因此,存在诸多理由进行冷冻储存细胞,总体概述有几大不得不冻存细胞的理由:




①由于遗传不稳定性而导致基因漂移;

②衰老,最后导致细胞系消失;

③生长特性的转化以及恶性相关特性的获得;

④由于选择和去分化导致表型的不稳定性;

⑤微生物污染;

⑥其他细胞系的交叉污染;

⑦由于操作粗心而导致的错误鉴别;

⑧孵育箱故障;

⑨对于保存那些不立即使用的细胞系,可节省时间和材料;

⑩需要将细胞系转给其他使用者。

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在考虑冻存细胞之前,需满足以下特定条件:




01

确认冻存前需证实细胞系未受污染,且确为该细胞系。尽管对于新获得的细胞系,可以在*确认前冻存几支,但在大量冻存前应进行*确认。


冻存时间,如果是有限细胞系,这些细胞应经5代倍增生长,获得足够量的细胞再进行冻存。连续细胞系应将其克隆化,选择特征性的克隆,待生长至足够数量再进行冻存。连续细胞系有其优势:它们可无限生长,生长比较迅速,容易克隆,但是它们缺乏遗传稳定性。有限细胞系通常或接近二倍体。在一定传代水平间是稳定的,但是,它们很难克隆,生长缓慢,最终死亡或发生转化。

02



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