原代细胞的培养问题

　　原代细胞培养问题：
 

　　1、原代细胞与细胞系有什么区别？
 

　　根据传统定义，自组织第一次收获和接种的细胞被称为原代细胞 [Freshney, R.I. (1987). Culture of Animal Cells. A Manual of Basic Technique. (New York, Alan R. Liss, Inc.)]. 这类细胞直接从组织分离，生命周期有限，经数次传代后会逐渐停止生长。原代细胞在有限的生命周期内需掌握好细胞的最大生长空间，以保持细胞群中基因型和表型的一致性。
 

　　细胞系是不断生长、分化的细胞群，因其经过遗传改造，致使其具有无限增长的潜能。体外生长的细胞系用于医疗或科研。
 

　　但实际上，经过长时间、连续的传代培养后，细胞系随着代数的增加，细胞的基因型和表型都有可能发生改变。
 

　　需要指出的是，在不同的科研小组中这些术语的定义会有所不同。许多研究员不用细胞系这个词表示细胞群，除非细胞经过了遗传改造。
 

　　2、倍增和代数有什么区别？
 

　　倍增是培养物中细胞总数的翻倍，通常是指细胞指数或对数生长期。代数是指细胞群从培养瓶中移出，传代培养过程的次数，传代培养的目的，是使细胞处于低密度以刺激其进一步生长。
 

　　3、接收到的冻存细胞该如何处理？
 

　　收到包装箱后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存。此过程尽量快，以避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。
 

　　4、冻存的细胞该如何开始培养？
 

　　(1) 将一管细胞从液氮罐中取出，注意保护手和眼睛。
 

　　(2) 将冻存管快速的放入37℃水浴中，轻轻握住并旋转，直到管内物体*融化。
 

　　(3) 将冻存管立即从水浴中拿出，擦干，转入无菌环境。
 

　　(4) 用70%的酒精冲洗冻存管，然后擦去多余酒精。
 

　　(5) 打开盖子，注意手指不要碰到里面的螺纹(注意，由于冻存管有负压，开盖时可能会有少量溢出，这是正常现象)。
 

　　(6) 用多聚赖氨酸(或参照说明书)包被培养瓶。多数细胞推荐的接种密度为每平方厘米5000个细胞。
 

　　(7) 盖好培养瓶的盖子，轻轻摇晃培养瓶以使细胞分布均匀。若需要气体交换可打开盖子。
 

　　(8) 将培养瓶放入培养箱中(37℃，5%CO2，95%空气)
 

　　(9) 放入培养箱后第6-16小时更换一次培养基，以去除残留的二甲基亚枫和未贴壁的细胞。
 

　　5、细胞培养过程中，多久更换一次培养基？
 

　　这取决于细胞生长的速度。一般而言2-3天更换一次培养基，许多细胞培养实验室通常在周一，周三，周五更换培养基。
 

　　注意：冻存细胞复苏后，在6-16小时内更换培养基，以去除残留的二甲基亚枫和死亡的细胞。
 

　　6、我能扩增培养和再次冻存原代正常人类细胞吗？
 

　　这取决于细胞的类型。一些细胞类型像神经细胞，神经胶质细胞和一些生长缓慢的上皮细胞，不推荐扩增培养和再次冻存。其它的细胞类型像成纤维细胞、星形细胞、肾系膜细胞、星形胶质细胞等等，可以扩增培养和再次冻存。
 

　　然而，需要注意的是再次冻存的过程可能导致细胞生长性能的改变。
 

　　7、培养瓶中应该加入多少体积的培养基？
 

　　我们推荐的用量为：T-25培养瓶5ml，T-75培养瓶15ml，T-150培养瓶30ml。