人正常肝细胞培养步骤

　　我们现在所知道的地球上的生命，人类、动物、植物，还有肉眼看不见的微观世界，这些林林总总的生命体都是由细胞所组成的。所以，生命体如何繁衍、变化、进化，组成纷繁复杂的大千世界，全都是依靠这些细胞在工作。细胞也有各式各样不同的分类，其中有一类细胞它很特殊，而且拥有其他细胞不具有的一项重要功能——不断繁衍、自我复制、自我更新。这类细胞就是干细胞。

　　人正常肝细胞培养步骤：

　　1）培养基及培养冻存条件准备：

　　1.准备培养基；

　　2.培养条件：气相：空气，95%；二氧化碳，5%温度：37摄氏度，培养箱湿度为70%-80%；

　　3.冻存液：90%血清，10%DMSO，现用现配。液氮储存。

　　2）细胞处理：

　　复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入lOcm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。细胞传代：如果细胞密度达80%-90%即可进行传代培养。

　　对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2ml消化液于培养瓶中，置于37°C培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加l-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。