a549细胞冻存方式

　　a549细胞正常状态下都呈长梭形,从你提供的细胞图片看,圆形细胞较多,可能是细胞生长过密,相互挤压所致!还有许多突起,估计是有其他细胞污染,或是培养液使用时间过长，有污染所致，建议更换新鲜培养液，用新瓶传代,密度不要过高!近来关于细胞过度传代的问题也引起了较为普遍的关注，由于过度传代造成遗传性状的不稳定性和一些表型的丧失使得体外生物学效应的偏差也日益增大，因此尽量在购买或者引进细胞株的时候尽量多多冻存低代次的细胞，以获得接近原始建株细胞的生物学特性。

　　a549细胞冻存方式：

　　1．将细胞消化下来，移入离心管离心，弃上清；

　　2．准备冻存液比例：50%FBS+40%培养基+10%DMSO（现用现配）；

　　3.加1.5冻存液在离心管中，将细胞吹打均匀，移入冻存管内。

　　放入-20度冰箱2-4小时后．再放入-80度冰箱过夜，第二天放入液氮罐保存。

　　A549细胞人肺癌细胞系常见的污染如下：

　　1、细菌：细菌在普通倒置显微镜下为黑色细沙状，根据感染细菌的不同，可有不同的外形，培养液一般会浑浊变黄，对细胞生长影响明显。

　　2、霉菌：培养液是清亮的，倒置显微镜下无杂质，37度孵箱培养2-3天，仍清亮，但出现絮状杂质，镜下可见呈细丝状的团状漂浮物，可看到明显的菌丝，细胞仍可生长，但时间长之后，细胞的活力状态变差，

　　用硫酸铜溶液擦拭CO2孵箱内，再把水盘里也加上饱和量的硫酸铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消毒磷酸氢二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。

　　3、支原体：黑色的，好象多为多形，培养液一般培养液一般会浑浊，原体感染，国内血清很多都没有做支原体阴性检测，而支原体是牛血清中常见的微生物之一。而且它不能用过滤的办法除去。支原体感染细胞以后，细胞病变不很明显，只是慢慢死去。

　　4、黑蛟虫：可以穿透滤膜，也可以通过空气传播，低倍下为黑色点状，高倍下可看见黑色的小虫游来游去，培养液也是不浑的，一般不会太影响，细胞还是可以用的。

　　5、真菌：一般培养液清亮，不变色，镜下有丝状物，有些真菌开始很像死细胞碎片，只是它很多很多的小块很清楚，象珊瑚状，不象细胞碎片分不清，慢慢的会长出很细的黑色丝状物。真菌生长的比较慢，不象细菌那么容易被发现，但是一旦发现有它的存在细胞就被污染了，也很难救活了。