raw264.7细胞培养经验分享

　　raw264.7细胞源自Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。sIg-,Ia-抗原、Thy-1.2表面抗原阴性。此细胞株不分泌可检测到的病毒颗粒，XC斑点形成试验阴性。可以胞饮中性红并吞噬乳胶颗粒与酵母聚糖。可以抗体依赖性地分解绵羊红血球与肿瘤靶细胞。LPS或PPD处理2天可诱导分解红血球但对肿瘤靶细胞无作用。

　　raw264.7细胞培养经验：

　　1.基本情况：小鼠来源白血病毒诱导肿瘤细胞，属于巨噬细胞，贴壁生长。下图是ATCC来源。主流观点是以椭圆圆形细胞为主，激活分化后才有触角。

　　形态以类圆形和不规则为主，一般1--2个核，极少数有3个核，胞浆伸展时胞体较大。镜下细胞为小珍珠似的圆形椭圆形。

　　2.培养情况

　　培养条件：10%FBS+高糖DMEN，进口gibco血清更好

　　传代：细胞增殖较快，70%即可传代，细胞有触角也提示需要传代，1：3----1:6传代，推荐使用皿。传代时切记不要使用胰酶，正常情况下此细胞贴壁不牢，直接吹打即可，胰酶消化会使细胞伸出触角改变形态。我是直接用培养基吹打，也可以用PBS，感觉无差异。这个细胞增殖较快，培养基消耗快容易变黄，要勤换液。

　　冻存和复苏：和普通细胞无异。

　　raw264.7细胞作为巨噬细胞有很强的吞噬能力，吞噬抗原后伸出长角，就是大家常见的伪足。同时贴壁黏附能力增强，传代时难以消化下来。该细胞贴壁时间短，成片生长，似小菌落般小片生长，连成一片并会叠层。传代密度不易过高或者过低，过低会导致细胞生长缓慢甚至不生长，过高，细胞会长出伪足。

　　3.关于RAW264.7分化，正常细胞为贴壁不牢的圆形椭圆形细胞，分化后伸出伪足，贴壁能力增强。

　　避免方法：

　　1，血清建议采用进口的真血清，

　　2，密度不要太高或者太低，传代时切不可拖延时间，

　　3，传代时切不可胰酶消化，直接吹打就能下来，

　　4，不要污染，包括其他细胞株的污染。