人支气管成纤维细胞是气道与外界环境接触的一道屏障

　　人支气管成纤维细胞是气道与外界环境接触的一道屏障，在慢性阻塞性肺疾病、哮喘、肺癌、肺囊性纤维化以及一些感染性呼吸道疾病的发病机制中均起着重要的作用，逐渐受到人们的重视。支气管上皮细胞不仅是各种病原体、炎症介质作用的靶细胞，还作为效应细胞合成、释放多种炎性介质和细胞因子，从而参与气道炎症及免疫反应，而体外培养的原代支气管上皮细胞由于与体内原组织在形态结构和功能活动上存在很大的相似性，支气管上皮细胞的原代培养成为研究呼吸道上皮功能的必要条件。

　　人支气管成纤维细胞试验方法：

　　1.体外培养人支气管上皮细胞株，人胚肺成纤维细胞株，并建立人支气管上皮细胞与人胚肺成纤维细胞共培养体系。

　　2.BRS-3激活、O3应激支气管上皮细胞后与肺成纤维细胞共培养，用MTT比色法检测肺成纤维细胞及支气管上皮细胞的增殖活性，羟脯氨酸试剂盒检测成纤维细胞胶原合成的状况。

　　3.为初步探讨支气管上皮细胞共培养对成纤维细胞的作用介质，收集支气管上皮细胞培养上清液，ELISA法及放射免疫分析法检测TGF-β1、TNF-a、PGE2含量，并观察其时间变化以及其含量与成纤维细胞活动的关系。

　　4.为证实共培养效应的重要介质为TGF-β1，TGF-β1反义寡核甘酸（ASO）设计，脂质体转染，MTT法检测TGF-β1ASO转染的支气管上皮细胞对成纤维细胞的增殖活性。

　　5.为观察支气管上皮细胞TGF-β1表达是否受与成纤维细胞共培养的影响，用免疫组织化学法检测单独培养的HBECs与共培养的HBECS TGF-B1表达差异，并进行定量分析。