染色凋亡试剂盒使用过程

　　染色凋亡试剂盒贴壁细胞：

　　A.取洁净盖玻片在70%乙醇中浸泡5分钟或更长时间，无菌超净台内吹干或用无菌的PBS或0.9%NaCl等溶液洗涤三遍，再用细胞培养液洗涤一遍。将盖玻片置于六孔板内，种入细胞培养过夜，使约为50%-80%满。

　　B.刺激细胞发生凋亡后，吸尽培养液，加入0.5ml固定液，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

　　C.去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。

　　D.加入0.5ml Hoechst33258染色液，染色5分钟。也宜用摇床，或手动晃动数次。

　　E.去染色液，用PBS或0.9%NaC1洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。

　　F.滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上贴有细胞的盖玻片，让细胞接触封片液，尽量避免气泡。

　　G.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460mm左右。

　　染色凋亡试剂盒悬浮细胞：

　　A.离心收集细胞样品于1.5ml离心管内，加入0.5ml固定液，缓缓悬起细胞，固定10分钟或更长时间（可4℃过夜）。

　　B.离心去固定液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟。洗涤期间手动晃动数次。

　　C.离心后吸去大部分液体保留约50ul液体，再缓缓悬起细胞，滴加至载玻片上，尽量使细胞分布均匀。

　　D.稍晾干，使细胞贴在载玻片上不易随液体流动。

　　E.均匀滴上0.5ml Hoechst33258染色液，染色5分钟。用吸水纸从边缘吸去液体，微晾干。

　　F.去染色液，用PBS或0.9%NaCl洗两遍，每次3分钟，吸尽液体。洗涤时宜用摇床，或手动晃动。

　　G滴一滴抗荧光淬灭封片液于载玻片上，盖上一洁净的盖玻片，尽量避免气泡。

　　H.荧光显微镜可检测到呈蓝色的细胞核。激发波长350nm左右，发射波长460mm左右。